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基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班
時間：2022-09-03 09:00 至 2022-09-04 18:00
地點：線上活動
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基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班 已過期會議時間：2022-09-03 09:00至 2022-09-04 18:00結束 會議地點： 線上活動 詳細地址會前通知 會議規模：暫無 主辦單位： 上海循掘生物科技中心
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會議介紹
會議內容 主辦方介紹
基因編輯技術與動物模型構建研討會9月班宣傳圖
2022年9月3-4日 騰訊會議網絡會議室
【網絡學習班背景】
CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期選擇壓力中形成的一種適應性免疫防御，可用來有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPR的Type II已經被廣泛用于基因工程，它包含Cas9，crRNA和tracrRNA，其中crRNA含有能夠識別20bp的靶向互補序列。Cas9，crRNA和tracrRNA組成復合體，識別并結合crRNA互補的序列，然后解開DNA雙鏈，Cas9中的HNH活性位點剪切crRNA的互補DNA鏈，RuvC活性位點剪切非互補鏈，最終導致DNA的雙鏈斷裂（DSB），進而實現基因的敲除和插入。
目前，CRISPR/Cas9系統已經廣泛用于對哺乳動物細胞，細菌，斑馬魚，小鼠，豬，猴的基因編輯。本學習班將詳細講解CRISPR/Cas9基因編輯工具原理，操作流程，理論結合實踐，將讓大家詳細了解到具體如何利用CRISPR/Cas9技術構建基因修飾動物等。學習班將為相關科研工作人員和興趣愛好者提供了很好的培訓資源。
【講師背景】
李博士，副研究員。2014年博士畢業于德國慕尼黑工業大學大型動物生物技術研究所, 獲極優等榮譽學位（MAGNA CUM LAUDE）。主要研究領域為基因編輯動物模型構建與應用研究，成功構建過ROSA26基因定點敲入大動物模型、Kras基因點突變大動物模型、小鼠基因編輯肝癌模型等，在基因編輯研究領域積累了較好的研究知識背景，擅長對該領域知識講解和傳授，講解深入淺出、邏輯性強，并可針對性對基因編輯實際操作問題進行解答與啟發，以期更好地讓基因編輯工具應用于您的工作和學習研究中。目前已發表論文22篇，其中第一作者/并列通訊作者SCI論文12篇，以第一發明人申請國家發明專利2項。主持完成國家自然科學基金等項目6項，獲得上海市實驗動物學會2020年度學會工作先進個人、2019年 “ICLAS-CALAS國際青年獎”、2018年第三十屆上海市優秀發明選拔賽銀獎、2017年上海市人才發展資金等。
【預期目標】
1、掌握基因打靶與基因編輯技術(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9)，能夠設計sgRNA靶點，構建CRISPR/Cas9質粒，用于基因敲除和敲入。
2、掌握CRISPR/Cas9質粒轉染方法, 陽性細胞克隆篩選方法體系，基因編輯細胞系的建立，基因修飾情況分析方法。
3、掌握CRISPR/Cas9脫靶產生的原因，脫靶檢測方法，降低脫靶問題的方法
4、掌握CRISPR/Cas9的實際應用，構建動物模型，對構建基因修飾小鼠和基因修飾大動物（豬）有較深入了解。
5、掌握新基因編輯工具，如：Cpf1, C2C2, base editing等。
6、掌握基因編輯研究領域前沿進展，基因編輯工具的拓展應用、臨床應用等，形成利用基因編輯工具結合自己研究內容等科學思維。
7、Base editor 使用方法。
8、基因編輯工具用于檢測新型冠狀病毒、基因編輯工具有可能應用于新冠治療等應用的介紹與拓展
【詳細日程】
基因編輯技術與動物模型構建研討會日程 | |||
日期 | 時間 | 主題 | 詳細內容 |
第一天上午 | 9:00-10:30 | 基因修飾技術簡介（一） | 基因打靶與基因編輯技術（ZNF, TALENs，CRISPR/Cas9）介紹 |
基因編輯、基因修飾、基因打靶、轉基因、基因敲除、基因敲入等專業領域概念梳理 | |||
CRISPR/Cas9結構和特點 | |||
如何使用CRISPR/Cas9系統對特定基因進行敲除或定點插入（詳細方法步驟） | |||
拓展如何提高定點敲入效率等知識 | |||
10:30-10:45 | 休息 | ||
10:45-12:00 | 基因修飾技術簡介（二） | 基因編輯工具Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的結構、特點、工作原理 | |
如何使用Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14系統進行編輯 | |||
Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14與Cas9的比較 | |||
Cas9、Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的應用和技術展望 | |||
上午現場答疑 | |||
12:00-13:30 | 午飯及午休 | ||
第一天下午 | 13:30-14:00 | CRISPR（sgRNA）設計方法和相關網站介紹 | sgRNA設計方法和相關網站介紹 |
CRISPR（sgRNA）的在線設計（在線互動設計演練） | |||
14:00-15:30 | 基因編輯實驗詳細操作 | gRNA oligos模板退火 | |
退火gRNA與線性化CRISPR/Cas9載體連接 | |||
連接產物轉化到大腸桿菌（DH5α），轉化產物涂板培養，CRISPR/Cas9重組子細菌克隆挑取，擴大化培養，鑒定陽性克隆 | |||
細胞轉染（Electroperation，Nuclefection，Nanofection，X-fection）等介紹與應用拓展 | |||
單細胞克隆篩選（有限稀釋法，濾紙法、環法、流式分選法等）方法介紹與應用拓展 | |||
15:30-15:45 | |||
15:45-17:00 | 利用CRISPR/Cas9技術編輯動物細胞系 | CRISPR/Cas9質粒細胞轉染方法 | |
陽性細胞克隆篩選，基因修飾基因組DNA模板快速制備 | |||
目的靶基因的基因組DNA片段的PCR擴增，電泳檢測PCR產物 | |||
PCR產物退火變性，T7E1酶切，電泳鑒定基因修飾情況 | |||
17:00-17:30 | CRISPR/Cas9關鍵點總結、歸納、拓展 | 基因編輯關鍵知識點歸納、總結和提煉 | |
CRISPR/Cas9技術應用拓展（如CAB基因敲入方法等介紹） | |||
第二天上午 | 9:00-10:30 | 利用基因編輯技術構建基因敲除或敲入小鼠 | 基因工程小鼠的詳細分類與比較 |
小鼠受精卵分離和培養 | |||
CRISPR/Cas9系統顯微注射到小鼠受精卵 | |||
受精卵顯微注射后回輸到代孕母鼠體內 | |||
PCR和T7E1分析和鑒定基因敲除小鼠（Founder） | |||
基因敲除小鼠基因敲除情況分析 | |||
CRISPR/Cas9構建基因敲除小鼠詳細實驗流程歸納和總結 | |||
10:30-10:45 | 休息 | ||
10:45-11:15 | 利用基因編輯技術構建大動物模型 | 以大動物豬為例，進行詳細介紹基因編輯技術在大動物模型中的應用 | |
利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大型動物（豬）流程 | |||
基因修飾大型動物優勢 | |||
利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大動物（豬）模型介紹 | |||
11:15-12:00 | 利用基因編輯技術構建動物模型的詳細案例介紹 | 利用CRISPR/Cas9構建基因修飾小鼠方法與相關基因修飾小鼠模型 | |
利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大動物（豬、猴）方法與相關基因修飾大動物模型 | |||
拓展基因編輯技術在其它物種中的應用 | 拓展基因編輯技術在其它物種中的應用 | ||
12:00-13:30 | 午飯及午休 | ||
第二天下午 | 13:30-15:00 | 實驗結果的點評與討論 | CRISPR/Cas9載體構建討論 |
目的靶基因的基因組DNA片段的PCR擴增，電泳檢測PCR產物結果討論 | |||
PCR產物T7E1酶切，電泳鑒定基因修飾情況結果討論 | |||
Sanger測序鑒定基因編輯結果：CRISPR/Cas9質粒陽性轉化子測序結果確認；Sanger測序閱讀基因編輯情況；如何從測序色譜圖中閱讀靶向突變等位基因型 | |||
15:00-15:30 | CRISPR/Cas9脫靶問題分析 | 脫靶產生的原因 | |
脫靶檢測方法 | |||
降低脫靶問題的方法 | |||
15:30-15:45 | |||
15:45-16:30 | 基因編輯領域進展大梳理與全面拓展 | 基因編輯技術的應用拓展介紹：SHERLOCK-V1、SHERLOCK-V2等應用于檢測方面的拓展，Base editing | |
結合當下新型冠狀病毒熱點，基因編輯工具用于檢測新型冠狀病毒、基因編輯工具有可能應用于新冠治療等應用的介紹與拓展 | |||
Cas系列突變體的介紹與應用 | |||
基因編輯的拓展應用（如應用于杜氏營養肌不良綜合征、白內障、消滅蚊子、植物中的應用、細菌中的應用等） | |||
基因編輯工具的倫理問題于討論 | |||
【收費標準】
會務費用：線上：2800元/人
會議時間：2022年9月3-4日
會議地點：線上：騰訊會議網絡會議室
主辦方：上海循掘生物科技中心
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上海循掘生物科技中心于2020年2月21日舉辦TCGA&GEO生信高通量數據挖掘分析研討會2020（2月深圳班）會議。
會議日程
會議嘉賓
參會指南
會議門票
| 票種名稱 | 價格 | 原價 | 票價說明 |
| 會務費 | ￥2800 | ￥ |
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溫馨提示
酒店與住宿:
為防止極端情況下活動延期或取消，建議“異地客戶”與活動家客服確認參會信息后，再安排出行與住宿。
退款規則:
活動各項資源需提前采購，購票后不支持退款，可以換人參加。
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會議支持：
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